Structural basis of thrombin-mediated factor V activation: The Glu 666-Glu672 sequence is critical for processing at the heavy chain - B domain junction

La activación catalizada por trombomba del factor de coagulación V (FV) es una reacción de retroalimentación positiva esencial dentro del sistema de coagulación sanguínea. El procesamiento eficiente en los sitios de clivaje de activación N- (Arg709-Ser 710) y C-terminal (Arg1545-Ser 1546) requiere interacciones iniciales del sustrato con 2 grupos de residuos cargados positivamente en la superficie de la proteinasa, exosites I y II. Abordamos el mecanismo de activación del factor V (FV) humano utilizando péptidos que cubren toda la región ácida anterior a estos sitios de escisión, FV (657-709)/ (FVa2) y FV(1481-1545)/(FVa3). FVa2 parece interactuar principalmente con la exosita I, mientras que ambas exositas están implicadas en interacciones con el enlace C-terminal. La estructura cristalina de 1,7-Å de la trombina irreversiblemente inhibida unida a FVa2 revela sin ambigüevocidad el acoplamiento de los residuos de FV Glu666-Glu 672 a la exosita I. Estos hallazgos se confirmaron en una segunda estructura de resolución media de FVa2 unida a la proteinasa inhibida por benzamidina. Nuestros resultados sugieren que el enlace ácido del dominio A2-B está implicado en interacciones importantes con la trombina durante la activación de cofactores, siendo su secuencia más N-terminal similar a la de un hirudin, desempeñando un papel crítico. Los experimentos de modelización indican que FVa2, y probablemente también FVa3, rodean la trombina en la trombina productiva· Complejos FV que cubren una gran superficie del activador para activar el sitio activo.